MQCA-Diagnose ELISA Kit For Chicken Pork Duck 96 Wells/Kit Sensitivity 0,5 Ppb

MQCA ELISA-Testkit für Huhn, Schweinefleisch, Ente, 96 Wells/Kit, Sensitivität 0,5 ppb

 

1. Prinzip

Dieses Testkit basiert auf dem kompetitiven Enzymimmunoassay zum Nachweis von MQCA in der Probe.Die Mikrotiterstreifen sind mit den Kopplungsantigenen vorbeschichtet.Das MQCA in der Probe und die auf den Mikrotiterstreifen vorbeschichteten Kopplungsantigene konkurrieren um den Anti-MQCA-Antikörper.Nach der Zugabe des Enzymkonjugats wird das TMB-Substrat zur Färbung zugegeben.Der Wert der optischen Dichte (OD) der Probe hat eine negative Korrelation mit dem darin enthaltenen MQCA.Dieser Wert wird mit der Standardkurve verglichen und anschließend die MQCA-Konzentration erhalten.

 

2. Technische Daten

Empfindlichkeit: 0,5 ppb
Inkubatortemperatur: 25℃
Inkubatorzeit: 30min~15min

Nachweisgrenze:
Gewebe 1 ppb

Kreuzreaktionsrate:
MQCA 100 %
Olaquindox < 0,1 %
Erholungsrate:
Gewebe 85 % ± 10 %

 

3. Komponenten

 

1	Streifen mit Mikrokavitäten	12 Streifen mit je 8 herausnehmbaren Vertiefungen
2	6× Standardlösung (je 1 mL)	0 ppb	0,5 ppb
		1,5 ppb	4,5 ppb
		13,5 ppb	40,5 ppb
3	Konzentriertes Enzymkonjugat	1 ml	rote Mütze
4	Antikörper Arbeitslösung	8 ml	blaue Kappe
5	Substrat A	7 ml	weiße Kappe
6	SubstratB	7 ml	schwarze Kappe
7	Lösung stoppen	7 ml	gelbe Kappe
8	Wiederauflösende Lösung	50 ml	transparente Kappe
9	20-fach konzentrierter Waschpuffer	40 ml	weiße Kappe

 

4. Erforderliche, aber nicht bereitgestellte Materialien

1) Ausrüstung: Mikroplatten-Lesegerät (450 nm/630 nm), Homogenisator, Oszillator, Zentrifuge, Messpipetten, Stickstofftrocknungsvorrichtung und Waage (ein Reziprokwert der Empfindlichkeit von 0,01 g), Inkubator.
2) Mikropipetten: Einkanal 20 bis 200 µl und 100 bis 1000 µl und Mehrkanal 30~300 µl;
3) Reagenzien: Ethylacetat, n-Hexan, HCl, NaCl, CH3CN

 

5. Probenvorbehandlung

Anweisungen
Folgende Punkte müssen vor der Vorbehandlung jeglicher Proben behandelt werden:
1) Nur die Einwegspitzen können für die Experimente verwendet werden und die Spitzen müssen gewechselt werden, wenn sie zum Aufsaugen verschiedener Reagenzien verwendet werden;
2) Jedes Versuchsgeschirr ist vor dem Versuch auf Sauberkeit zu prüfen und gegebenenfalls nachzureinigen, um die Versuchsergebnisse störende Verunreinigungen zu vermeiden.

Probenvorbereitung
1) Probenextrakt (1 Monat lang bei 2~8℃ lagern): Nehmen Sie 8,6 ml konzentrierte HCl, fügen Sie entionisiertes Wasser auf 500 ml hinzu und fügen Sie dann 10 g NaCl hinzu, um den Probenextrakt zu erhalten.

5.1 Vieh- und Geflügelgewebe (Huhn, Ente, Schwein):
1. 2 ± 0,05 g der homogenisierten Probe in ein 50-ml-Zentrifugenröhrchen geben;
2. 4 mL Probenextrakt zugeben, 1 Minute gründlich schütteln;
3. Fügen Sie 4 ml Ethylacetat und 2 ml CH3CN hinzu, schütteln Sie 10 Sekunden lang gründlich;Zentrifugieren Sie bei 4000 U/min bei Raumtemperatur (20 - 25 ℃) für 10 min (Hinweis: Dieser Schritt muss nur 10 Sekunden lang geschüttelt werden, zu langes Schütteln führt zu einer Emulgierung, wenn eine Emulgierung auftritt, nehmen Sie einen bestimmten Überstand und schütteln Sie das Röhrchen dann leicht für 5 Sekunden , erneut zentrifugieren, dann kann genug Überstand kommen);
4. 3 ml organische Phase oben in einen klaren Behälter geben, unten mit Stickstoff oder Luft trocknen
56℃Wasserbad;
5. 1 ml N-Hexan zugeben, 30 s schütteln, dann 0,5 ml Redissolving-Lösung zugeben, schütteln und 30 s gründlich mischen;bei 4000 U/min bei Raumtemperatur (20-25 ℃) für 5 min zentrifugieren.
6. Entfernen Sie die organische Up-Layer-Phase. Nehmen Sie 50 µL Down-Layer zur Analyse.
Verdünnungsfaktor der Probe: 0,5

 

6. ELISA-Verfahren

6.1 Anweisungen
1) Bringen Sie alle Reagenzien und Mikrotiterstreifen vor Gebrauch auf Raumtemperatur (20-25 ℃);
2) Bringen Sie alle Reagenzien sofort nach Gebrauch auf 2-8 ℃ zurück;
3) Die Reproduzierbarkeit der ELISA-Analyse hängt in hohem Maße von der Konsistenz des Plattenwaschens ab.Der korrekte Betrieb des Plattenwaschens ist der Schlüsselpunkt in den Verfahren von ELISA;
4) Für die Inkubation bei konstanten Temperaturen müssen alle Proben und Reagenzien Lichteinwirkung vermeiden, und jede Mikrotiterplatte sollte durch die Abdeckmembran verschlossen werden.

6.2 Betriebsverfahren
1) Nehmen Sie alle notwendigen Reagenzien heraus und stellen Sie sie mindestens 30 Minuten lang bei Raumtemperatur (20-25 ℃) auf.Beachten Sie, dass jedes Reagenz vor Gebrauch geschüttelt werden muss, um es gleichmäßig zu mischen;
2) Nehmen Sie die erforderlichen Mikrotiterstreifen und Plattenrahmen.Unbenutzte Mikrotiterplatte erneut versiegeln, bei 2-8 °C lagern;
3) Lösungsvorbereitung: 40 ml des 20-fach konzentrierten Waschpuffers mit entionisiertem Wasser bei 1:19 verdünnen (1 Teil 20-fach konzentrierter Waschpuffer + 19 Teile entionisiertes Wasser) oder nach Bedarf ansetzen;
4) Nummerierung: Mikrovertiefungen nach Proben und Standardlösung nummerieren;jede Probe und Standardlösung sollte doppelt durchgeführt werden;notieren Sie ihre Positionen;
5) Bereiten Sie eine Mischlösung aus Antikörper-Arbeitslösung und konzentriertem Enzymkonjugat vor: Mischen Sie Antikörper-Arbeitslösung und konzentriertes Enzymkonjugat im Verhältnis 10:1 gleichmäßig (1000 ul Antikörper-Arbeitslösung + 100 ul konzentriertes Enzymkonjugat, diese Mischlösung sollte nach der Zubereitung verwendet werden, sie kann nicht verwendet werden gespeichert werden, die Verpackungsmenge hat eine zusätzliche Menge, bereiten Sie vor, wie der Anteil in Ordnung ist.)
6) 20 µl der Probe oder Standardlösung in getrennte Vertiefungen geben, dann 70 µl Mischlösung aus Antikörper-Arbeitslösung und konzentriertem Enzymkonjugat in jede Vertiefung geben.Mischen Sie durch leichtes Schütteln, versiegeln Sie die Mikrotiterplatte mit der Abdeckmembran und inkubieren Sie sie 30 Minuten lang bei 25 °C im Dunkeln;
7) Waschen Sie die Mikrotiterplatte vier- bis fünfmal mit dem Waschpuffer bei 250 µl/Vertiefung;Vertiefung 15-30 Sek. mit Waschpuffer einweichen, mit saugfähigem Papier zum Trocknen klappen (wenn nach dem Klappen Blasen vorhanden sind, mit sauberen Spitzen abschneiden);
8) Färbung: Geben Sie 50 µl der Substrat A-Lösung und 50 µl der B-Lösung in jede Vertiefung.Durch leichtes Schütteln mischen und zur Färbung 15 min im Dunkeln bei 25 °C inkubieren;
9) Bestimmung: 50 µL Stopplösung in jede Vertiefung geben.Durch leichtes Schütteln mischen.Stellen Sie die Wellenlänge des Mikroplattenlesers auf 450 nm ein, um den OD-Wert zu bestimmen.(es wird empfohlen, den OD-Wert bei der Dual-Wellenlänge 450/630 nm innerhalb von 5 min abzulesen).

 

7. Ergebnisbeurteilung

Es gibt zwei Methoden, um die Ergebnisse zu beurteilen;das erste ist die grobe Beurteilung, während das zweite die quantitative Bestimmung ist.Beachten Sie, dass der OD-Wert der Probe eine negative Korrelation mit dem Gehalt an MQCA aufweist.

7.1 Qualitative Bestimmung
Der Konzentrationsbereich (ng/mL) ergibt sich aus dem Vergleich des mittleren OD-Wertes der Probe mit dem der Standardlösung.Unter der Annahme, dass der OD-Wert der Probe Ⅰ 0,3 und der der Probe Ⅱ 1,0 beträgt, während die der Standardlösungen wie folgt sind: 2,043 für 0 ppb, 1,716 für 0,5 ppb, 1,215 für 1,5 ppb, 0,74 für 4,5 ppb, 0,313 für 13,5 ppb und 0,155 für 40,5 ppb, entsprechend beträgt der Konzentrationsbereich der Probe Ⅰ 13,5 bis 40,5 ppb und der der Probe Ⅱ 1,5 bis 4,5 ppb.

7.2 Quantitative Bestimmung
Der Mittelwert der Extinktionswerte entspricht dem prozentualen Anteil des mittleren OD-Wertes (B) der Probe und der Standardlösung dividiert durch den OD-Wert (B0) der ersten Standardlösung (0-Standard) und anschließend multipliziert mit 100 % , das ist,

 

Prozentsatz des Extinktionswerts =	B	×100%
	B0

 

 

B – der durchschnittliche (doppelte Vertiefungen) OD-Wert der Probe oder der Standardlösung
B0 – der durchschnittliche OD-Wert der 0 ng/ml-Standardlösung
Zeichnen Sie die Standardkurve mit den Absorptionsprozentsätzen der Standardlösungen und den halblogarithmischen Werten der MQCA-Standardlösungen (ng/ml) als Y- bzw. X-Achse.Lesen Sie die entsprechende Konzentration der Probe aus der Standardkurve ab, indem Sie den Absorptionsprozentsatz in die Standardkurve aufnehmen.Der resultierende Wert wird anschließend mit dem entsprechenden Verdünnungsfaktor multipliziert, wodurch schließlich die MQCA-Konzentration in der Probe erhalten wird.
Die Verwendung der professionellen Analysesoftware dieses Kits ist für die genaue und schnelle Analyse einer großen Probenmenge bequemer.(Bitte kontaktieren Sie uns für diese Software)

 

8. Vorsichtsmaßnahmen

1. Die Raumtemperatur unter 25 ℃ oder die Temperatur der Reagenzien und der Proben, die nicht auf Raumtemperatur (20-25 ℃) zurückgebracht werden, führt zu einem niedrigeren Standard-OD-Wert
2. Die Trockenheit der Mikroplatte im Waschprozess wird von Situationen begleitet, die die nichtlinearen Standardkurven und die unerwünschte Reproduzierbarkeit beinhalten
3. Mischen Sie alle Reagenzien und Reaktionsgemische gleichmäßig und waschen Sie die Mikrotiterplatte gründlich, da sonst die unerwünschte Reproduzierbarkeit auftritt
4. Die Stopplösung ist die 2 M Schwefelsäurelösung, vermeiden Sie den Kontakt mit der Haut;
5. Legen Sie die unbenutzte Mikrotiterplatte in einen selbstversiegelnden Beutel, um sie wieder zu versiegeln.Die Standardsubstanz und der farblose Farbbildner sind lichtempfindlich und können daher nicht direkt dem Licht ausgesetzt werden
6. Verwenden Sie das Kit nicht nach Ablauf des Verfallsdatums.Die Verwendung von verdünnten oder verfälschten Reagenzien aus den Kits führt zu Änderungen der Empfindlichkeit und der OD-Nachweiswerte.Tauschen Sie die Reagenzien aus Kits mit unterschiedlichen Chargennummern nicht gegeneinander aus
7. Verwerfen Sie die Färbelösung mit jeder Farbe, die auf die Degeneration dieser Lösung hinweist.Der Nachweiswert der 0-Standardlösung von weniger als 0,5 zeigt ihre Degeneration an
8. Die optimale Reaktionstemperatur beträgt 25 ℃, und zu hohe oder zu niedrige Temperaturen führen zu Änderungen der Nachweisempfindlichkeit und der OD-Werte.

 

9. Aufbewahrungs- und Verfallsdatum

Lagerung: bei 2-8 ℃ lagern, nicht einfrieren.
Ablaufdatum: 12 Monate;Produktionsdatum steht auf der Verpackung.
Hinweis: Wenn die Vakuumverpackung der Mikroplatte undicht ist, kann sie weiterhin verwendet werden. Beeinflussen Sie das Testergebnis nicht. Seien Sie entspannt bei der Verwendung.

 

 

 

 

 

Q1: Wann wird es versendet?
A1: Wir versenden die Ware schnellstmöglich innerhalb von 7 Werktagen nach Zahlungseingang für Sie.(Bei externen Faktoren wie der Epidemie kann sich die Lieferung verzögern)

 

Q2: Unterstützt es OEM/ODM?
A2: Es kann unterstützt werden, aber die spezifische Menge muss mehr als 100.000 Stück betragen, was für kundenspezifische Produkte praktisch ist.

 

Q3: Wie geht es Ihrer Fabrik in Bezug auf die Qualitätskontrolle?
A3: Wir haben national ISO9001 und ISO13485 zertifiziert.Unser Produktionsprozess entspricht Standardverfahren, um eine optimale Produktqualität zu gewährleisten.

 

Q4: Wie erbringt man Kundendienst?
A4: Wir bieten professionellen technischen Online-Kundendienst.Wir beraten Sie individuell per Video, Telefon etc.

 

Q5: Was ist die Zahlungsmethode?
A5: Wir erhalten die Zahlung per T/T.

 

Q6: Wie versendet man?
A6: Wählen Sie die für Sie beste Versandmethode, indem Sie Angebote von unseren vielen kooperativen Spediteuren einholen, und versenden Sie auch gemäß Ihren Anforderungen.