Amantadin Diagnose-ELISA Kit For Chicken Pork Duck 96 Wells/Kit Sensitivity 0,2 Ppb

Amantadin-ELISA-Testkit für Huhn, Schweinefleisch, Ente, 96 Vertiefungen/Kit, Sensitivität 0,2 ppb

 

1. Prinzip

Dieses Testkit basiert auf dem kompetitiven Enzymimmunoassay zum Nachweis von Amantadin.Das Kopplungsantigen ist auf den Mikrotiterstreifen vorbeschichtet.Das Amantadin in der Probe und die auf den Mikrotiterstreifen vorbeschichteten Kopplungsantigene konkurrieren um die Anti-Amantadin-Antikörper.Nach der Zugabe des Enzymkonjugats wird das TMB-Substrat zur Färbung zugegeben.Der Wert der optischen Dichte (OD) der Probe hat eine negative Korrelation mit dem Amantadin in der Probe.Dieser Wert wird mit der Standardkurve verglichen und anschließend werden die Amantadin-Reste erhalten.

 

2. Technische Daten

Empfindlichkeit: 0,2 ppb
Inkubatortemperatur: 25℃
Inkubatorzeit: 30min~15min

Nachweisgrenze:
Huhn, Ente 0,2 ppb

Kreuzreaktionsrate:
Amantadin 100%

Erholungsrate:
Huhn, Ente 90±25%

 

3. Komponenten

 

1	Streifen mit Mikrokavitäten	12 Streifen mit je 8 herausnehmbaren Vertiefungen
2	6× Standardlösung (je 1 mL)	0ppb	0,2 ppb
		0,8 ppb	3,2 ppb
		12,8 ppb	51,2 ppb
3	Enzymkonjugat	7ml	rote Mütze
4	Antikörper Arbeitslösung	7ml	blaue Kappe
5	Substrat A	7ml	weiße Kappe
6	SubstratB	7ml	schwarze Kappe
7	Lösung stoppen	7ml	gelbe Kappe
8	Extraktionsmittel	50ml*2	transparente Kappe
9	20-fach konzentrierter Waschpuffer	15ml	weiße Kappe
10	5-fach konzentrierte Lösung zum Auflösen	10ml	weiße Kappe

 

4. Erforderliche, aber nicht bereitgestellte Materialien

 

1) Geräte: ELISA-Reader (450 nm/630 nm), Homogenisator, Schüttler, Zentrifuge, Waage: 0,01 g mengensensitiv, Stickstofftrocknungsvorrichtung, Inkubator, Messpipetten, Drucker

2) Mikropipetten: Einkanal 20 ml ~ 200 ml, 100 ml ~ 1000 ml, Mehrkanal 30 ~ 300 μl

3) Reagenzien: Acetonitril, n-Hexan.

 

5. Probenvorbehandlung

 

Anleitung (Folgende Punkte müssen vor der Vorbehandlung behandelt werden)

1) Nur die Einwegspitzen können für die Experimente verwendet werden und die Spitzen müssen gewechselt werden, wenn sie zum Aufsaugen verschiedener Reagenzien verwendet werden;

2) Jedes Versuchsgeschirr muss vor dem Versuch sauber sein und sollte gegebenenfalls nachgereinigt werden, um die Versuchsergebnisse störende Kontaminationen zu vermeiden.

 

Lösungsvorbereitung vor der Probenvorbehandlung:

1) Probenextraktlösung

6 Teile Acetonitril + 1 Teil Extraktionsmittel, um die gebrauchsfertige Probenextraktlösung zu erhalten.

2) Probenrücklösungslösung

Verwenden Sie 1 Teil konzentrierte Lösung zur Auflösung der Probe (5X) und lösen Sie sie mit 4 Teilen entionisiertem Wasser auf, um die gebrauchsfertige Lösung zur Auflösung der Probe zu erhalten.

Probenvorbereitung

 

5.1 Zubereitung einer Hähnchen-, Entenprobe

1) Nehmen Sie 3,0 ± 0,05 g homogenisierte Gewebeprobe in ein 50-ml-Zentrifugenröhrchen;6 ml Probenextraktlösung zugeben, 3 min schütteln, 5 min bei über 4000 U/min bei Raumtemperatur (20 - 25 ℃) zentrifugieren;

2) 2 ml klare organische Phase in einen trockenen Behälter geben, mit Stickstoff oder Luft bei 50~60 °C trocken blasen;

3) Zuerst 1 ml n-Hexan zugeben, dann 0,5 ml Probenrücklösungslösung zugeben, 30 Sekunden lang mischen, bei über 4000 U/min bei Raumtemperatur (20–25 °C) 5 Minuten lang zentrifugieren, n-Hexan in der oberen Schicht verwerfen;

4) Nehmen Sie 50 μl Flüssigkeit der unteren Schicht zum Testen

Verdünnungsfaktor: 0,5

 

6. ELISA-Verfahren

 

6.1 Anweisungen

1. ELISA-Reagenzien vor Gebrauch auf Raumtemperatur (20 - 25 °C) bringen.

2. Stellen Sie die ELISA-Reagenzien sofort nach Gebrauch wieder auf 2-8 °C zurück

3. Die ELISA-Reproduzierbarkeit im Analyseprozess hängt weitgehend von der Konsistenz der Waschplatte ab, der korrekte Waschplattenbetrieb ist der Bestimmungspunkt des ELISA-Programms

4. Vermeiden Sie bei allen Inkubationsprozessen bei konstanter Temperatur Lichteinwirkung und versiegeln Sie die Mikrotiterplatte mit der Abdeckfolie

 

6. 2 Betriebsverfahren

1. Bringen Sie das Testkit für mindestens 30 Minuten auf Raumtemperatur (20-25 ℃), beachten Sie, dass jedes Reagenz vor Gebrauch gleichmäßig geschüttelt werden muss;

2. Legen Sie die erforderlichen Mikrotiterstreifen in die Plattenrahmen.Unbenutzte Mikrotiterplatte wieder versiegeln, bei 2-8 °C lagern, nicht einfrieren.

3. Lösungsvorbereitung: 15 ml 20-fach konzentrierten Waschpuffer mit deionisiertem Wasser auf 300 ml verdünnen.

4. Nummerierung: Mikrokavitäten nach Proben und Standardlösung nummerieren;jede Probe und Standardlösung sollte doppelt durchgeführt werden;ihre Positionen notieren.

5. Standard/Probe hinzufügen: 50 µl der Probe oder der Standardlösung in getrennte Duplikatvertiefungen geben, dann Enzymkonjugat zugeben, 50 µl/Vertiefung;dann Antikörper-Arbeitslösung, 50 &mgr;l/Vertiefung.Durch manuelles Schütteln der Platte vorsichtig mischen, Mikroplatte mit der Abdeckmembran verschließen, bei 25 °C 30 min im Dunkeln inkubieren.

6. Mikrotiterplatte waschen: Deckelmembran vorsichtig öffnen, Flüssigkeit aus Mikrotiterplatte gießen;Fügen Sie 250 µL/Vertiefung verdünnten Waschpuffer hinzu, waschen Sie 4–5 Mal vollständig, jeweils 15–30 Sekunden lang, nehmen Sie sie dann heraus und klappen Sie sie zum Trocknen mit saugfähigem Papier zusammen. (Verwenden Sie einen unbenutzten Speer, um die Blase nach dem Trocknen zu durchstechen)

7. Färbung: Geben Sie 50 µl Substrat A-Lösung und dann 50 µl B-Lösung in jede Vertiefung.Durch manuelles Schütteln der Platte vorsichtig mischen und zur Färbung 15 Minuten lang bei 25 °C im Dunkeln inkubieren.

8. Bestimmung: 50 µL der Stopplösung in jede Vertiefung geben.Mischen Sie vorsichtig, indem Sie die Platte manuell schütteln.Stellen Sie die Wellenlänge des Mikroplatten-Lesegeräts auf 450 nm ein, um den OD-Wert jeder Vertiefung zu bestimmen.(Es wird empfohlen, den OD-Wert bei der Dual-Wellenlänge 450/630 nm innerhalb von 5 Minuten abzulesen).

 

7. Ergebnisbeurteilung

Es gibt zwei Methoden, um die Ergebnisse zu beurteilen;das erste ist die grobe Beurteilung, während das zweite die quantitative Bestimmung ist.Beachten Sie, dass der OD-Wert der Probe eine negative Korrelation mit dem Amantadin in der Probe aufweist

7.1 Qualitative Bestimmung
Der Konzentrationsbereich (ng/ml) kann durch Vergleich des durchschnittlichen Extinktionswerts mit Standards ermittelt werden.Angenommen, der Extinktionswert von Probe Eins ist 0,3, Probe Zwei ist 1,0 und die Standards sind: 0 ppb von 2,243;0,2 ppb von 2,054;0,8 ppb von 1,715;3,2 ppb von 1,074;12,8 ppb von 0,451;51,2 ppb von 0,155.Dann liegt die Konzentration der ersten Probe im Bereich von 12,8 ppb ~ 51,2 ppb;Probe 2 ist 3,2 ppb ~ 12,8 ppb.Den Konzentrationsbereich von Amantadin in den Proben erhält man durch Multiplikation mit der entsprechenden Verdünnung der Probe.
 

7. 2 Quantitative Analyse
Um die Konzentration von Proben zu berechnen, sollte eine Standardkurve erstellt werden.Bevor eine Standardkurve erstellt wird, sollte das Konzept der prozentualen Extinktion bekannt sein.
Berechnung der % Extinktion:

 

Prozentsatz des Extinktionswerts =	B	×100%
	B0

 

B – der durchschnittliche OD-Wert der Probe oder der Standardlösung
B0 – der durchschnittliche OD-Wert der 0 ng/ml-Standardlösung
Damit wird der Nullstandard gleich 100 % gesetzt und die Extinktionswerte in Prozent angegeben.Die für die Standards errechneten Werte werden in einem Koordinatensystem auf halblogarithmischem Millimeterpapier gegen die Amantadin-Konzentration [ng/mL] aufgetragen.Die der Extinktion jeder Probe entsprechende Amantadin-Konzentration in ng/mL (ppb) kann aus der Kalibrierkurve abgelesen werden.
Eine spezielle Software zur Ergebnisauswertung von ELISA erleichtert Doppel- oder Mehrfachbestimmungen.Bei Bedarf bitte telefonisch anfragen.

 

8. Vorsichtsmaßnahmen

 

1. Der Standard-OD-Wert ist niedrig, wenn die Raumtemperatur niedriger als 25℃ oder die Reagenztemperatur ist und die Probe nicht auf Raumtemperatur (20-25℃) zurückgekehrt ist.
2. Die Mikroplatte wird während des Waschvorgangs getrocknet, was von einer Nichtlinearität der Standardkurve und einer schlechten Reproduzierbarkeit begleitet wird;Fahren Sie daher direkt nach dem Waschen mit dem nächsten Schritt fort.
3. Vor Zugabe von Reagenzien gut mischen.
4. Die Stopplösung ist 2 M Schwefelsäurelösung, Hautkontakt vermeiden.
5. Verwenden Sie das Kit nicht über das Verfallsdatum hinaus.Die Verwendung von verdünnten oder verfälschten Reagenzien aus dem Kit kann zu Änderungen der Empfindlichkeit und der OD-Werte des Nachweises führen.Ersetzen Sie keine Reagenzien in verschiedenen Chargen von Kits.
6. Lagerung: Bei 2-8°C lagern, nicht einfrieren.Verschließen Sie unbenutzte Mikrotiterplatten wieder in selbstverschließenden Beuteln.Standardmaterialien und farblose Kuppler sind lichtempfindlich und können nicht direkt belichtet werden.
7. Entsorgen Sie jegliche Färbelösung, deren Farbe darauf hinweist, dass sich die Lösung zersetzt hat.Der Nachweiswert (450/630 nm) der 0-Standardlösung (0 ppb) beträgt weniger als 0,5 ((A450 nm < 0,5)), was auf eine Denaturierung hinweist.
8. Die optimale Reaktionstemperatur beträgt 25℃.Wenn die Temperatur zu hoch oder zu niedrig ist, ändern sich die Nachweisempfindlichkeit und der OD-Wert.

 

9. Aufbewahrungs- und Verfallsdatum

Lagerung: bei 2-8 ℃ lagern, nicht einfrieren.
Ablaufdatum: 12 Monate;Produktionsdatum steht auf der Verpackung.
Hinweis: Wenn die Vakuumverpackung der Mikroplatte undicht ist, kann sie weiterhin verwendet werden. Beeinflussen Sie das Testergebnis nicht. Seien Sie entspannt bei der Verwendung.

 

 

 

 

 

Q1: Wann wird es versendet?
A1: Wir versenden die Ware schnellstmöglich innerhalb von 7 Werktagen nach Zahlungseingang für Sie.(Bei externen Faktoren wie der Epidemie kann sich die Lieferung verzögern)

 

Q2: Unterstützt es OEM/ODM?
A2: Es kann unterstützt werden, aber die spezifische Menge muss mehr als 100.000 Stück betragen, was für kundenspezifische Produkte praktisch ist.

 

Q3: Wie geht es Ihrer Fabrik in Bezug auf die Qualitätskontrolle?
A3: Wir haben national ISO9001 und ISO13485 zertifiziert.Unser Produktionsprozess entspricht Standardverfahren, um eine optimale Produktqualität zu gewährleisten.

 

Q4: Wie erbringt man Kundendienst?
A4: Wir bieten professionellen technischen Online-Kundendienst.Wir beraten Sie individuell per Video, Telefon etc.

 

Q5: Was ist die Zahlungsmethode?
A5: Wir erhalten die Zahlung per T/T.

 

Q6: Wie versendet man?
A6: Wählen Sie die für Sie beste Versandmethode, indem Sie Angebote von unseren vielen kooperativen Spediteuren einholen, und versenden Sie auch gemäß Ihren Anforderungen.