Metronidazole ELISA Antibody Fast Detection Kit für Honig 96 Wells/Kit Sensitivity 0,05 Ppb

Metronidazol ELISA Testkit für Honig 96 Wells/Kit Empfindlichkeit 0,05 ppb

1. Prinzip

Dieses Testkit basiert auf dem kompetitiven Enzymimmunoassay zum Nachweis von Metronidazol in der Probe.Die Mikrotiterstreifen sind mit den Kopplungsantigenen vorbeschichtet.Das Metronidazol in der Probe und die auf den Mikrotiterstreifen vorbeschichteten Kopplungsantigene konkurrieren um die Anti-Metronidazol-Antikörper.Nach der Zugabe des Enzymkonjugats wird das TMB-Substrat zur Färbung zugegeben.Der Wert der optischen Dichte (OD) der Probe hat eine negative Korrelation mit dem darin enthaltenen Metronidazol.Dieser Wert wird mit der Standardkurve verglichen und anschließend die Metronidazol-Konzentration erhalten.

2. Technische Daten

Empfindlichkeit: 0,05 ppb
Nachweisgrenze
Honig: etwa 0,1 ppb
Hinweis: ppb = ng/ml oder ng/g

Kreuzreaktionsrate:
Metronidazol 100 %
Ornidazol 83 %
Secnidazol 110 %
Metronidazol-OH <1%
Tinidazol <1 %
Dimetridazol <1 %

Wiederherstellungsrate: 90 ± 30 %
 

3. Komponenten

4. Erforderliche, aber nicht bereitgestellte Materialien

1) Ausrüstung: Mikroplattenlesegerät (450 nm, 630 nm), Drucker, Stickstofftrocknungsvorrichtung, Vortex, Schüttler, Zentrifuge (3000 g und mehr), Messpipetten, Waage (eine reziproke Empfindlichkeit von 0,01 g), Inkubator (4℃, 25℃ ), Wasserbad, Timer;
2) Mikropipetten: Einkanal 20-200 µl, 100-1000 µl und Achtkanal 30~300 µl;
3) Reagenzien (AR): Na2HPO4 ▪12H2O,NaH2PO4·2H2O,Ethylacetat, Hexan, deionisiertes Wasser.

5. Probenvorbehandlung

Anweisungen
Folgende Punkte müssen vor der Vorbehandlung jeglicher Proben behandelt werden:
1) Nur die Einwegspitzen können für die Experimente verwendet werden und die Spitzen müssen gewechselt werden, wenn sie zum Aufsaugen verschiedener Reagenzien verwendet werden;
2) Vor dem Versuch muss jede Versuchsausrüstung sauber sein und sollte gegebenenfalls nachgereinigt werden, um die Versuchsergebnisse störende Kontaminationen zu vermeiden.

Lösungsvorbereitung vor der Probenvorbehandlung:
1) Waschpuffer: 1 Teil 20-fach konzentrierter Waschpuffer + 19 Teile deionisiertes Wasser.
2) 0,2 M Phosphatpuffer: Wiegen Sie 25,8 g Na2HPO4 ▪ 12H2O, 4,350 g NaH2PO4·2H2O, fügen Sie 500 ml deionisiertes Wasser hinzu, um sich vollständig aufzulösen.
 

5.1 Probenvorbereitung
Schatz
1) 2,0 ± 0,05 g Honigprobe in ein 50-ml-Plastikzentrifugenröhrchen einwiegen;
2) 2 ml 0,2 M Phosphatpuffer zugeben, dann 8 ml Ethylacetat zugeben, 5 min kräftig schütteln (oder 3 min vortexen), um die Probe vollständig mit der organischen Phase in Kontakt zu bringen;
3) Zentrifugieren bei über 3000 g bei Raumtemperatur für 5 min;
4) Übertragen Sie 4 ml klare Flüssigkeit der oberen Schicht in ein 5-ml-Zentrifugenröhrchen (Hinweis: nehmen Sie keine Wasserphase der unteren Schicht), blasen Sie sie in einem 50-60 ° C warmen Wasserbad zum Trocknen;
5) Fügen Sie entsprechend 1 ml Hexan und 0,5 ml Redissolving-Lösung hinzu, schütteln Sie 2 Minuten lang kräftig (oder verwenden Sie 1 Minute lang den Vortexer);
6) Zentrifugieren bei über 3000 g bei Raumtemperatur für 5 min;
7) Organische Phase der oberen Schicht verwerfen, 50 ul Flüssigkeit der unteren Schicht zum Testen nehmen.
Verdünnungsfaktor der Probe: 0,5

6. ELISA-Verfahren

6.1 Anweisungen
1) Bringen Sie alle Reagenzien und Mikrotiterstreifen vor Gebrauch auf Raumtemperatur (20-25 ℃);
2) Bringen Sie alle Reagenzien sofort nach Gebrauch auf 2-8 ℃ zurück;
3) Die Reproduzierbarkeit der ELISA-Analyse hängt in hohem Maße von der Konsistenz des Plattenwaschens ab.Der richtige Ablauf des Plattenwaschens ist der entscheidende Punkt bei den ELISA-Verfahren;
4) Für die Inkubation bei konstanten Temperaturen müssen alle Proben und Reagenzien Lichteinwirkung vermeiden, und jede Mikrotiterplatte sollte durch die Abdeckmembran verschlossen werden.

6.2 Betriebsverfahren
1. Bringen Sie das Testkit für mindestens 30 Minuten auf Raumtemperatur (20-25 ℃). Beachten Sie, dass jedes Reagenz vor Gebrauch geschüttelt werden muss, um es gleichmäßig zu mischen. Legen Sie die erforderlichen Mikrotiterstreifen in die Plattenrahmen.Unbenutzte Mikrotiterplatte wieder versiegeln, bei 2–8 °C lagern, nicht einfrieren.
2. Nummerierung: Mikrokavitäten nach Proben und Standardlösung nummerieren;Jede Probe und jede Standardlösung sollte doppelt durchgeführt werden, notieren Sie ihre Positionen.
3. Geben Sie 50 µl der Probe oder Standardlösung in separate Doppelvertiefungen;dann fügen Sie 50 µl der Antikörper-Arbeitslösung in jede Vertiefung hinzu und mischen Sie vorsichtig, indem Sie die Platte manuell schütteln.Versiegeln Sie die Mikrotiterplatte mit der Abdeckmembran und inkubieren Sie sie bei 4 °C für 60 Minuten im Dunkeln.
4. Flüssigkeit aus der Mikrovertiefung gießen, 250 µl/Vertiefung Waschpuffer zum Waschen der Mikrotiterplatte für 15–30 s hinzugeben, dann Waschpuffer aus der Mikrovertiefung gießen, Waschpuffer hinzufügen, um auf diese Weise 3–4 Mal zu waschen, dann herausnehmen und mit saugfähigem Papier zum Trocknen klappen.
5. Fügen Sie 100 ul Enzymkonjugat hinzu (stellen Sie die Mikroplatte nach dem Waschschritt nicht für längere Zeit auf Raumtemperatur, um ein Austrocknen der Mikroplatte zu vermeiden, was zu einem Unterschied im Ergebnis führt), mischen Sie vorsichtig, indem Sie die Platte manuell schütteln.Versiegeln Sie die Mikrotiterplatte mit der Abdeckmembran und inkubieren Sie bei 25 °C für 20 Minuten im Dunkeln.Waschen wie Schritt 4.
6. Färbung: Geben Sie 100 ul Mischung aus Substrat A-Lösung und Substrat B-Lösung in jede Vertiefung (Hinweis: Mischen Sie Substrat A-Lösung und Substrat B-Lösung im Verhältnis 1:1, verwenden Sie die Mischung in 10 Minuten, verwenden Sie kein Metall zum Einschließen oder Rühren). Substrat vermeiden ungültig).Mischen Sie vorsichtig, indem Sie die Platte manuell schütteln, versiegeln Sie die Mikroplatte mit der Abdeckmembran und inkubieren Sie dann zur Färbung 15 Minuten lang bei 25 °C im Dunkeln.
7. Bestimmung: 50 µL der Stopplösung in jede Vertiefung geben.Mischen Sie vorsichtig, indem Sie die Platte manuell schütteln.Stoppen Sie erfolgreich, wenn die Substratfarbe von blau nach gelb wechselt.Es wird empfohlen, den OD-Wert bei der Dual-Wellenlänge 450/630 nm innerhalb von 5 Minuten abzulesen.

7. Ergebnisbeurteilung

Es gibt zwei Methoden zur Beurteilung der Ergebnisse: Die erste ist die grobe Beurteilung, die zweite die quantitative Bestimmung.Beachten Sie, dass der OD-Wert der Probe eine negative Korrelation mit der Metronidazol-Konzentration aufweist.

7.1 Qualitative Bestimmung
Der Konzentrationsbereich (ng/ml) von Metronidazol kann aus dem Vergleich des mittleren OD-Werts der Probe mit dem der Standardlösung ermittelt werden.Unter der Annahme, dass der OD-Wert der ProbeⅠ 0,3 und der der ProbeⅡ 1,0 beträgt, beträgt der OD-Wert der Standardlösungen: 2,243 für 0 ppb, 1,816 für 0,05 ppb, 1,415 für 0,15 ppb, 0,74 für 0,45 ppb, 0,313 für 1,35 ppb , 0,155 für 4,05 ppb, entsprechend beträgt der Konzentrationsbereich der ProbeⅠ 1,35 bis 4,05 ppb und der der ProbeⅡ 0,05 bis 0,45 ppb.

7.2 Quantitative Bestimmung
Der Mittelwert der Extinktionswerte ergibt sich aus dem mittleren OD-Wert (B) der Probe und der Standardlösung dividiert durch den OD-Wert (B0) der ersten Standardlösung (0-Standard) und anschließend mit 100 % multipliziert, also ,

B – der durchschnittliche OD-Wert der Probe oder der Standardlösung
B0 – der durchschnittliche OD-Wert der 0 ng/ml-Standardlösung
Zeichnen Sie die Standardkurve mit den Absorptionsprozentsätzen der Standardlösung und den halblogarithmischen Werten der Metronidazol-Standardlösung (ng/ml) als Y- bzw. X-Achse.Lesen Sie die entsprechende Konzentration der Probe aus der Standardkurve ab, indem Sie den Absorptionsprozentsatz in die Standardkurve aufnehmen.Der resultierende Wert wird anschließend mit dem entsprechenden Verdünnungsfaktor multipliziert und man erhält schließlich die Metronidazol-Konzentration in der Probe.
Die Verwendung der professionellen Analysesoftware dieses Kits ist für die genaue und schnelle Analyse einer großen Probenmenge bequemer.(Bitte kontaktieren Sie uns für diese Software).

8. Vorsichtsmaßnahmen

1. Die Raumtemperatur unter 25 ℃ oder die Temperatur der Reagenzien und der Proben, die nicht auf Raumtemperatur (20-25 ℃) zurückgebracht werden, führt zu einem niedrigeren Standard-OD-Wert.
2. Die Trockenheit der Mikroplatte im Waschprozess wird von Situationen begleitet, die die nichtlinearen Standardkurven und die unerwünschte Reproduzierbarkeit umfassen;Fahren Sie also direkt nach dem Waschen mit dem nächsten Schritt fort.
3. Gleichmäßig mischen, sonst kommt es zur unerwünschten Reproduzierbarkeit.
4. Die Stopplösung ist die 2 M Schwefelsäurelösung, vermeiden Sie den Kontakt mit der Haut.
5. Verwenden Sie das Kit nicht nach Ablauf des Verfallsdatums.Die Verwendung von verdünnten oder verfälschten Reagenzien aus den Kits führt zu Änderungen der Empfindlichkeit und der OD-Nachweiswerte.Tauschen Sie die Reagenzien aus den Kits verschiedener zu verwendender Chargen nicht aus.
6. Legen Sie die unbenutzte Mikrotiterplatte in einen selbstversiegelnden Beutel, um sie wieder zu versiegeln.Die Standardlösung und der farblose Farbbildner sind lichtempfindlich und können daher nicht direkt dem Licht ausgesetzt werden.
7. Verwerfen Sie die Färbelösung mit jeder Farbe, die auf die Degeneration dieser Lösung hinweist.Der Nachweiswert der Standardlösung 1 (0 ppb) von weniger als 0,5 zeigt ihre Degeneration an.

9. Aufbewahrungs- und Verfallsdatum

Lagerung: bei 2-8 ℃ lagern, nicht einfrieren.
Ablaufdatum: 12 Monate;Produktionsdatum steht auf der Verpackung.

Q1: Wann wird es versendet?
A1: Wir versenden die Ware schnellstmöglich innerhalb von 7 Werktagen nach Zahlungseingang für Sie.(Bei externen Faktoren wie der Epidemie kann sich die Lieferung verzögern)

Q2: Unterstützt es OEM/ODM?
A2: Es kann unterstützt werden, aber die spezifische Menge muss mehr als 100.000 Stück betragen, was für kundenspezifische Produkte praktisch ist.

Q3: Wie geht es Ihrer Fabrik in Bezug auf die Qualitätskontrolle?
A3: Wir haben national ISO9001 und ISO13485 zertifiziert.Unser Produktionsprozess entspricht Standardverfahren, um eine optimale Produktqualität zu gewährleisten.

Q4: Wie erbringt man Kundendienst?
A4: Wir bieten professionellen technischen Online-Kundendienst.Wir bieten Ihnen eine persönliche Beratung per Video, Telefon usw.

Q5: Was ist die Zahlungsmethode?
A5: Wir erhalten die Zahlung per T/T.

Q6: Wie versendet man?
A6: Wählen Sie die für Sie beste Versandmethode, indem Sie Angebote von unseren vielen kooperativen Spediteuren einholen, und versenden Sie auch gemäß Ihren Anforderungen.