Diagnose-ELISA Kit For Milk Food Safety Empfindlichkeit 96Wells/Kit des Garnelen-Nitrofuran-AMOZ 0.03ppb

Nitrofuran AMOZ Diagnostisches ELISA-Kit für Milchempfindlichkeit 0,03 ppb 96 Wells/Kit

 

1.Diagnostisches ELISA-KitPrinzip

Dieses Nachweiskit basiert auf einem kompetitiven Enzymimmunoassay zum Nachweis von AMOZ in Proben.Konjugierte Antigene sind auf Mikrotiterstreifen vorbeschichtet.Das AMOZ in der Probe konkurriert mit dem konjugierten Antigen, das auf dem Mikrotiterstreifen vorbeschichtet ist, um Anti-AMOZ-Antikörper.Nachdem das Enzymkonjugat zugegeben wurde, wird TMB-Substrat zum Färben zugegeben.Der Wert der optischen Dichte (OD) einer Probe korreliert negativ mit der darin enthaltenen AMOZ.Dieser Wert wird mit einer Standardkurve verglichen und anschließend die AMOZ-Konzentration erhalten.

 

2. Technische Daten

 

Empfindlichkeit: 0,03 ppb

Inkubationstemperatur: 25℃

Inkubationszeit: 30min~15min

Nachweisgrenze Gewebe, Ei, Honig: 0,1 ppb

Kreuzreaktionsrate

AMOZ 100%

AHD < 0,1 %

AOZ < 0,1 %

SEM < 0,1 %

Erholungsrate

Gewebe 80 ± 25 %

Honig 75 ± 25 %

Ei 95 ± 25 %

 

3.Nitrofuran AMOZ ELISA Lebensmittelsicherheits-TestkitKomponenten

 

1	Streifen mit Mikrokavitäten	12 Streifen, davon 8 abnehmbar Brunnen jeweils
2	6× Standardlösung (je 1 mL)	0ppb	0,03 ppb
		0,09 ppb	0,27 ppb
		0,81 ppb	2,43 ppb
3	Enzymkonjugat	7ml	rote Mütze
4	Antikörper Arbeitslösung	7ml	blaue Kappe
5	Substrat A	7ml	weiße Kappe
6	SubstratB	7ml	schwarze Kappe
7	Lösung stoppen	7ml	gelbe Kappe
8	20-fach konzentrierter Waschpuffer	40ml	weiße Kappe
9	2× konzentrierte Lösung zum Auflösen	50ml	transparente Kappe
10	2-Nitrobenzaldehyd (C7H5NO3)	2-Nitrobenzaldehyd (C7H5NO3)	2-Nitrobenzaldehyd (C7H5NO3)

 

 

4. Erforderliche, aber nicht bereitgestellte Materialien
1) Ausrüstung: Mikroplatten-Reader, Drucker, Homogenisator, Stickstofftrockner, Vortexer, Zentrifuge, Messröhrchen, Waage (reziprok 0,01 g), Inkubator, Wasserbad;
2) Mikropipetten: Einkanal 20–200 μl, 100–1000 μl, Mehrkanal 30–300 μl;
3) Reagenzien: NaOH, Ethylacetat, n-Hexan, HCl (etwa 36,5 %), K2HPO4 · 3H2O

5. Probenvorbereitung

anweisen
Vor jeglicher Probenvorbehandlung sind folgende Punkte zu beachten:
1) Das Experiment kann nur Einwegspitzen verwenden, und die Spitzen müssen ersetzt werden, wenn verschiedene Reagenzien angesaugt werden;
2) Vor dem Versuch muss jedes Versuchsgerät gereinigt und ggf. nachgereinigt werden, um eine Beeinträchtigung der Versuchsergebnisse durch Kontaminationen zu vermeiden.

Lösungsvorbereitung vor der Probenvorbehandlung:
1) 0,1 M K2HPO4: Lösen Sie 11,4 g K2HPO4 3H2O in deionisiertem Wasser auf 500 ml auf.
2) 1 M HCl: 8,6 ml HCl (ca. 36,5 %) in deionisiertem Wasser auf 100 ml auflösen.
3) 1 M NaOH: 4 g NaOH in deionisiertem Wasser auf 100 ml auflösen.
4) Verdünnen Sie die 2-fach konzentrierte Lösung zum erneuten Auflösen mit deionisiertem Wasser im Verhältnis 1:1 (1 ml konzentrierte Lösung zum erneuten Auflösen + 1 ml deionisiertes Wasser), um die Probe erneut aufzulösen.

 

5.1 Probenvorbereitung

a)Gewebe, Eier
1) Wiegen Sie 1 ± 0,05 g der homogenen Probe, geben Sie 4 ml destilliertes Wasser, 0,5 ml 1 M HCl und 100 µl 2-Nitrobenzaldehyd (C7H5NO3) in jedes Röhrchen und schütteln Sie es 2 Minuten lang entsprechend;
2) Inkubieren Sie über Nacht bei 37°C (etwa 16 Stunden) oder in einem Wasserbad bei 56°C (2 Stunden).
3) Geben Sie 5 ml 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml 1 M NaOH und 6 ml Ethylacetat in jedes Röhrchen und schütteln Sie es 30 Sekunden lang.
4) Zentrifugieren Sie bei Raumtemperatur (20–25 °C) über 4000 U/min für 10 Minuten (wenn es zu einer Emulgierung kommt oder die Ethylacetatschicht weniger als 3 ml beträgt, inkubieren Sie die Probe in einem Wasserbad bei 80 °C für 10 Minuten und zentrifugieren Sie wiederholt; oder erhöhen Sie die Geschwindigkeit und verlängern Sie die Zentrifugationszeit).
5) Die 3 ml Ethylacetatschicht in ein neues Zentrifugenröhrchen überführen und mit Stickstoff oder Luft bei 50°C zur Trockene eindampfen.
6) Lösen Sie den getrockneten Rückstand in 2 ml n-Hexan, fügen Sie 1 ml der verdünnten rekonstituierten Lösung hinzu, mischen Sie 30 Sekunden lang gut, zentrifugieren Sie bei Raumtemperatur (20–25 °C) bei einer Geschwindigkeit von mehr als 4000 U/min für 10 Protokoll;Entfernen Sie die obere n-Hexan-Phase.(Wenn eine Emulgierung auftritt, entfernen Sie die obere n-Hexan-Phase, inkubieren Sie die Probe 10–20 Minuten lang in einem 70 °C warmen Wasserbad und zentrifugieren Sie sie wiederholt).
7) Nehmen Sie 50 µl der unteren Schicht zur Analyse.
Probenverdünnungsfaktor: 2

b) Honig
1) 2 ± 0,05 g homogene Probe (Honig) abwiegen, 4 ml destilliertes Wasser, 0,5 ml 1 M HCl und 100 µl 2-Nitrobenzaldehyd (C7H5NO3) in jedes Röhrchen geben, 2 Minuten lang entsprechend schütteln;
2) Inkubieren Sie über Nacht bei 37°C (etwa 16 Stunden) oder in einem Wasserbad bei 56°C (2 Stunden).
3) Geben Sie 5 ml 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml 1 M NaOH und 6 ml Ethylacetat in jedes Röhrchen und schütteln Sie es 30 Sekunden lang.
4) Zentrifugieren Sie bei Raumtemperatur (20–25 °C) über 4000 U/min für 10 Minuten (wenn es zu einer Emulgierung kommt oder die Ethylacetatschicht weniger als 3 ml beträgt, zentrifugieren Sie die Probe wiederholt in einem Wasserbad bei 80 °C für 10 Minuten; oder Drehzahl erhöhen und Zentrifugationszeit verlängern).
5) Die 3 ml Ethylacetatschicht in ein neues Zentrifugenröhrchen überführen und mit Stickstoff oder Luft bei 50°C zur Trockene eindampfen.
6) Den getrockneten Rückstand in 2 ml n-Hexan auflösen, 1 ml der verdünnten rekonstituierten Lösung zugeben, 30 Sekunden lang gut mischen, bei Raumtemperatur (20–25 °C) mit einer Geschwindigkeit von 4000 U/min oder mehr zentrifugieren 10 Minuten;Entfernen Sie die obere n-Hexan-Phase.(Wenn eine Emulgierung auftritt, entfernen Sie die obere n-Hexan-Phase, inkubieren Sie die Probe 10–20 Minuten lang in einem 70 °C warmen Wasserbad und zentrifugieren Sie sie wiederholt).
7) Nehmen Sie 50 µl der unteren Schicht zur Analyse.
Probenverdünnungsfaktor: 1

 

 

6. ELISA-Verfahren

6.1 Beschreibung
1) Alle Reagenzien und Mikrotiterstreifen vor Gebrauch auf Raumtemperatur (20-25 °C) bringen;
2) Stellen Sie alle Reagenzien unmittelbar nach Gebrauch wieder auf 2-8°C zurück;
3) Die Reproduzierbarkeit von ELISA-Assays hängt weitgehend von der Konsistenz des Plattenwaschens ab.Der richtige Ablauf des Plattenwaschens ist der Schlüssel zum ELISA-Verfahren;
4) Während der Inkubation bei konstanter Temperatur müssen alle Proben und Reagenzien vor Licht geschützt werden, und jede Mikrotiterplatte sollte mit einer Abdeckfolie verschlossen werden.

6.2 Betriebsverfahren
1) Legen Sie das Kit mindestens 30 Minuten lang bei Raumtemperatur (20-25 °C) ab, beachten Sie, dass jedes Reagenz vor Gebrauch gut geschüttelt und gemischt werden muss, und legen Sie die erforderlichen Mikrotiterstreifen in den Plattenrahmen.Unbenutzte Mikrotiterplatten sollten wieder verschlossen und bei 2-8 °C gelagert werden, nicht eingefroren.
2) Lösungsvorbereitung: 40 ml 20 × konzentrierter Waschpuffer, 1:19 mit deionisiertem Wasser verdünnt (1 Teil 20 × konzentrierter Waschpuffer + 19 Teile deionisiertes Wasser).Oder nach Bedarf vorbereiten.
3) Nummerierung: Nummerieren Sie die Mikrowells entsprechend den Proben und Standardlösungen;Jede Probe und jede Standardlösung sollten in zweifacher Ausfertigung hergestellt und ihre Positionen notiert werden.
4) Geben Sie 50 µl Probe oder Standardlösung in getrennte Wiederholungsvertiefungen;Geben Sie 50 ul Enzymkonjugat in jede Vertiefung, fügen Sie dann 50 ul Antikörper-Arbeitslösung hinzu und schütteln Sie die Platte von Hand, um sie vorsichtig zu mischen.Versiegeln Sie die Mikrotiterplatte mit einer Abdeckfolie und inkubieren Sie sie 30 Minuten lang bei 25 °C.
5) Gießen Sie die Flüssigkeit in die Mikrotiterplatte aus, tupfen Sie sie auf saugfähigem Papier trocken, fügen Sie 250 µl/Well Waschpuffer hinzu, um die Mikrotiterplatte 15–30 Sekunden lang zu waschen, entfernen Sie sie dann und tupfen Sie sie mit saugfähigem Papier trocken, wiederholen Sie dies 4–5 Mal.(Wenn nach dem Klopfen Luftblasen vorhanden sind, schneiden Sie diese mit einer sauberen Spitze ab).
6) Farbentwicklung: 50 µl Substrat A in jede Vertiefung geben, gefolgt von 50 µl Substrat B. Vorsichtig mischen, indem die Platte von Hand geschüttelt wird, dann im Dunkeln bei 25 °C für 15 min inkubieren, um die Farbe zu entwickeln.
7) Assay: 50 μl Stopplösung in jede Vertiefung geben.Mischen Sie vorsichtig, indem Sie die Platte von Hand schütteln.Stellen Sie die Wellenlänge des Mikroplattenlesers auf 450 nm ein, um den OD-Wert jedes Brunnens zu bestimmen.(Es wird empfohlen, OD-Werte bei zwei Wellenlängen von 450/630 nm innerhalb von 5 Minuten abzulesen).

 

7. Ergebnisbeurteilung

 

Es gibt zwei Methoden zur Beurteilung der Ergebnisse: Die erste ist die grobe Beurteilung, die zweite die quantitative Bestimmung.Beachten Sie, dass der OD-Wert der Probe eine negative Korrelation mit der AMOZ-Konzentration aufweist.

7.1 Qualitative Bestimmung

Der Konzentrationsbereich (ng/ml) von AMOZ kann aus dem Vergleich des durchschnittlichen OD-Werts der Probe mit dem der Standardlösung ermittelt werden.Unter der Annahme, dass der OD-Wert der ProbeⅠ 0,3 und der der ProbeⅡ 1,0 beträgt, beträgt der OD-Wert der Standardlösungen: 2,243 für 0 ppb, 1,816 für 0,03 ppb, 1,415 für 0,09 ppb, 0,74 für 0,27 ppb, 0,313 für 0,81 ppb , 0,155 für 2,43 ppb, entsprechend beträgt der Konzentrationsbereich der ProbeⅠ 0,81 bis 2,43 ppb und der der ProbeⅡ 0,09 bis 0,27 ppb.

7.2 Quantitative Bestimmung

Der Mittelwert der Extinktionswerte ergibt sich aus dem mittleren OD-Wert (B) der Probe und der Standardlösung dividiert durch den OD-Wert (B0) der ersten Standardlösung (0-Standard) und anschließend mit 100 % multipliziert, also ,

Prozentsatz des Extinktionswerts =	B	×100%
	B0

B – der durchschnittliche OD-Wert der Probe oder der Standardlösung

B0 – der durchschnittliche OD-Wert der 0 ng/ml-Standardlösung

Zeichnen Sie die Standardkurve mit den Absorptionsprozentsätzen der Standardlösung und den halblogarithmischen Werten der AMOZ-Standardlösung (ng/ml) als Y- bzw. X-Achse.Lesen Sie die entsprechende Konzentration der Probe aus der Standardkurve ab, indem Sie den Absorptionsprozentsatz in die Standardkurve aufnehmen.Der resultierende Wert wird anschließend mit dem entsprechenden Verdünnungsfachen multipliziert und man erhält schließlich die AMOZ-Konzentration in der Probe.

 

8. Angelegenheiten, die Aufmerksamkeit erfordern
1) Die Raumtemperatur ist niedriger als 25℃ oder die Reagenztemperatur und die Probe sind nicht auf Raumtemperatur (20-25℃) zurückgekehrt, was dazu führt, dass der Standard-OD-Wert sinkt.
2) Während des Waschvorgangs wird das Trocknen der Mikroplatte von der Nichtlinearität der Standardkurve und der unbefriedigenden Reproduzierbarkeit begleitet;Fahren Sie daher direkt nach dem Waschen mit dem nächsten Schritt fort.
3) Gut mischen, sonst schlechte Reproduzierbarkeit.
4) Die Stopplösung ist 2 M Schwefelsäurelösung, Hautkontakt vermeiden.
5) Verwenden Sie das Kit nicht über das Verfallsdatum hinaus.Die Verwendung von verdünnten oder verfälschten Reagenzien aus dem Kit kann zu Änderungen der Empfindlichkeit und der OD-Werte des Nachweises führen.Ersetzen Sie keine Reagenzien aus anderen Kit-Chargen.
6) Unbenutzte Mikrotiterplatten wieder in selbstverschließenden Beuteln versiegeln.Standardlösungen und farblose Kuppler sind lichtempfindlich und können nicht direkt belichtet werden.
7) Entsorgen Sie jegliche Färbelösung, deren Farbe anzeigt, dass sich die Lösung zersetzt hat.Ein Nachweiswert von weniger als 0,5 für die Standardlösung 1 (0 ppb) weist auf einen Abbau hin.
8) Die optimale Reaktionstemperatur beträgt 25℃, und die Nachweisempfindlichkeit und der OD-Wert ändern sich, wenn die Temperatur zu hoch oder zu niedrig ist.
 

9. Speicher- und Gültigkeitsdauer
Lagerung: Bei 2-8°C lagern, nicht einfrieren.
Ablaufdatum: 12 Monate;Produktionsdatum steht auf der Verpackung.
Hinweis: Wenn die Mikroplatten-Vakuumverpackung undicht ist, kann sie dennoch verwendet werden, ohne die Testergebnisse zu beeinträchtigen, sodass Sie sie unbesorgt verwenden können.

 

 

Q1: Wann wird es versendet?
A1: Wir versenden die Ware schnellstmöglich innerhalb von 7 Werktagen nach Zahlungseingang für Sie.(Bei externen Faktoren wie der Epidemie kann sich die Lieferung verzögern)

 

Q2: Unterstützt es OEM/ODM?
A2: Es kann unterstützt werden, aber die spezifische Menge muss mehr als 100.000 Stück betragen, was für kundenspezifische Produkte praktisch ist.

 

Q3: Wie geht es Ihrer Fabrik in Bezug auf die Qualitätskontrolle?
A3: Wir haben national ISO9001 und ISO13485 zertifiziert.Unser Produktionsprozess entspricht Standardverfahren, um eine optimale Produktqualität zu gewährleisten.

 

Q4: Wie erbringt man Kundendienst?
A4: Wir bieten professionellen technischen Online-Kundendienst.Wir bieten Ihnen eine persönliche Beratung per Video, Telefon usw.

 

Q5: Was ist die Zahlungsmethode?
A5: Wir erhalten die Zahlung per T/T.

 

Q6: Wie versendet man?
A6: Wählen Sie die für Sie beste Versandmethode, indem Sie Angebote von unseren vielen kooperativen Spediteuren einholen, und versenden Sie auch gemäß Ihren Anforderungen.