Empfindlichkeit 0.01ppb 96Wells/Kit des Nitrofuran-AOZ Kit Test ELISA For Fish Shrimp Honey

Nitrofuran AOZ ELISA Test Kit für Fisch-Garnele Honey Sensitivity 0.01ppb 96Wells/Kit

 

1. Prinzip

Dieses fschnelle Testausrüstung ood Sicherheitbasiert auf dem wettbewerbsfähigen Enzym Immunoassay für die Entdeckung von AOZ in der Probe. Die Kopplungsantigene werden auf den mikro--gut Streifen vorgalvanisiert. Die AOZ in der Probe und in den Kopplungsantigenen, die auf den mikro--gut Streifen vorgalvanisiert werden, konkurrieren für die anti--AOZ Antikörper. Nachdem der Zusatz des Enzymparonyms, das TMB-Substrat für Färbung hinzugefügt ist. Der Wert der optischen Dichte (Od) der Probe hat eine negative Wechselbeziehung mit dem AOZ in ihm. Dieser Wert wird mit der Standardkurve verglichen und die AOZ-Konzentration wird nachher erreicht.

2. Komponenten

1	Mikro--gut Streifen	12 Streifen mit 8 entfernbar je Brunnen
2	Standardlösung 6× (1mL jedes)	0ppb	0.01ppb
		0.03ppb	0.09ppb
		0.27ppb	0.81ppb
3	Enzymparonym	7ml	rote Kappe
4	Antikörperfunktionslösung	7ml	blaue Kappe
5	Substrat A	7ml	weiße Kappe
6	SubstrateB	7ml	schwarze Kappe
7	Stoppen Sie Lösung	7ml	gelbe Kappe
8	20× konzentrierte waschenden Puffer	40ml	weiße Kappe
9	2× konzentrierte das Wieder auflösen der Lösung	50ml	transparente Kappe
10	2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3)	10ml	schwarze Kappe

 

3. Technische Spezifikationen

Empfindlichkeit: 0.01ppb

Inkubationstemperatur: 25℃

Inkubationszeit: 30min~15min

Nachweisgrenze

Gewebe, Ei, Honig: 0.05ppb

Kreuzreaktionsrate

AOZ 100%

AMOZ <0>

AHD <0>

SEM <0>

Wiederfindungsrate

Gewebe, Ei 95±25%

Honig 85±23%

 

4. Materialien erfordert aber nicht bereitgestellt

1) Ausrüstungen: microplate Leser, Drucker, Homogenisierer, Stickstofftrocknergerät, Turbulenz, die Zentrifuge, messend pipettiert, Balance (eine gegenseitige Empfindlichkeit von 0,01 g), Brutkasten, Wasserbad;

2) Micropipettors: Einkanal- µL 20-200 µL, 100-1000 und Mehrkanal-µl 30~300;

3) Reagenzien: NaOH, Ethylacetat, N-Hexan, HCI (ungefähre 36,5%), K2HPO4·3H2O

 

5. Beispielvorbehandlung

Anweisungen

Mit die folgenden Punkte müssen vor der Vorbehandlung der Art der Probe irgendwie beschäftigt werden:

1) Nur die Wegwerfspitzen können für die Experimente verwendet werden und die Spitzen müssen geändert werden, wenn sie für das Absorbieren von verschiedenen Reagenzien verwendet werden;

2) Vor dem Experiment muss jede experimentelle Ausrüstung sauber sein und sollte gegebenenfalls wieder-gesäubert werden, um die Verschmutzung zu vermeiden, die die Versuchsergebnisse behindert.

Lösungsvorbereitung vor Beispielvorbehandlung:

1) 0,1 M K2HPO4: lösen Sie g 11,4 K2HPO4 auf·3H2O in entionisiertem Wasser zu 500mL.

2) 1 M HCl: lösen Sie 8.6mL HCI (ungefähre 36,5%) in entionisiertem Wasser zu 100mL auf.

3) 1 m-NaOH: lösen Sie NaOH 4g in entionisiertem Wasser zu 100mL auf.

4) das 2×concentrated, das Lösung wieder auflöst, wird mit entionisiertem Wasser am 1:1 (1mL konzentrierte das Wieder auflösen der Lösung + des 1mL entionisierten Wassers), verdünnt, verwendet für Beispieldas wieder auflösen.

 

5,1 Beispielvorbereitung

a)Gewebe, Ei

1) Wiegen Sie 1± 0.05g der homogenisierten Probe, fügen Sie 4mL des destillierten Wassers, 0.5mL 1 M HCI hinzu und 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) zu jedem Rohr, rütteln richtig für 2min;.

2) Brüten Sie at37℃ in Nacht (Stunden approx16) aus oder brüten Sie at56℃ durch Wasserbad aus (2 Stunden).

3) Fügen Sie 5mL 0.1M K2HPO4, 0.4mL 1M NaOH und 6mL Ethylacetat jedem Rohr, Erschütterung für 30s hinzu.

4) Zentrifuge an oben genanntem 4000r/min bei Zimmertemperatur (℃ 20-25) für 10min (wenn es Emulgierung gibt, oder Ethylacetatschicht nicht genug für 3ml ist, Probe bei 80 ℃ Wasserbad für 10min und Zentrifuge wiederholt ausbrütet; oder erhöhen Sie Geschwindigkeit und verlängern Sie Zeit der Zentrifuge).

5) Übertragung 3mL der Ethylacetatschicht in ein neues zentrifugales Rohr und auf Stickstoff oder dem Luftweg an 50℃ trocken verdunsten.

6) Lösen Sie die trockenen Rückstände im N-Hexan 2mL auf, fügen Sie 1mL der verdünnten wieder auflösenden Lösung, Mischung richtig für 30 Sekunden, Zentrifuge an über 4000 r/min bei Zimmertemperatur (℃ 20-25) für Minute 10 hinzu; Entfernen Sie Obenschicht N-Hexan Phase (wenn es Emulgierung, nachdem man Obenschicht N-Hexan Phase gibt entfernt hat, Probe bei 70 ℃ Wasserbad für 10-20min ausbrütet, wiederholt zentrifugiert).

7) Nehmen Sie 50 µL vom niedrigeren für Analyse.

Falte der Verdünnung der Probe: 2

 

b) Honig

1) Wiegen Sie 2± 0.05g der homogenisierten Probe (Honig), fügen Sie 4mL des destillierten Wassers, 0.5mL 1 M HCI hinzu und 100 µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) zu jedem Rohr, rütteln richtig für 2min;.

2) Brüten Sie at37℃ in Nacht (Stunden approx16) aus oder brüten Sie at56℃ durch Wasserbad aus (2 Stunden).

3) Fügen Sie 5mL 0.1M K2HPO4, 0.4mL 1M NaOH und 6mL Ethylacetat jedem Rohr, Erschütterung für 30s hinzu.

4) Zentrifuge an oben genanntem 4000r/min bei Zimmertemperatur (20-25℃) für 10min (wenn es Emulgierung gibt, oder Ethylacetatschicht nicht genug für 3ml ist, Probe bei 80 ℃ Wasserbad für 10min und Zentrifuge wiederholt ausbrütet; oder erhöhen Sie Geschwindigkeit und verlängern Sie Zeit der Zentrifuge).

5) Übertragung 3mL der Ethylacetatschicht in ein neues zentrifugales Rohr und auf Stickstoff oder dem Luftweg bei ℃ 50 trocken verdunsten.

6) Lösen Sie die trockenen Rückstände im N-Hexan 2mL auf, fügen Sie 1mL der verdünnten wieder auflösenden Lösung, Mischung richtig für 30 Sekunden, Zentrifuge an über 4000r/min bei Zimmertemperatur (℃ 20-25) für Minute 10 hinzu; Entfernen Sie Obenschicht N-Hexan Phase (wenn es Emulgierung, nachdem man Obenschicht N-Hexan Phase gibt entfernt hat, Probe bei 70 ℃ Wasserbad für 10-20min ausbrütet, wiederholt zentrifugiert).

7) Nehmen Sie 50 µL vom niedrigeren für Analyse.

Falte der Verdünnung der Probe: 1

 

6. ELISA-Verfahren

6,1 Anweisungen

1) Holen Sie alle Reagenzien und mikro--gut Streifen zur Raumtemperatur (℃ 20-25) vor Gebrauch;

2) Bringen Sie alle Reagenzien zu ℃ 2-8 sofort nach Gebrauch zurück;

3) Die Reproduzierbarkeit der ELISA-Analyse hängt in hohem Grade von der Übereinstimmung der Plattenreinigung ab. Die korrekte Operation des Plattenwaschens ist der springende Punkt in ELISA die Verfahren;

4) Für die Ausbrütung bei den konstanten Temperaturen, müssen alle Proben und Reagenzien Belichtung vermeiden, und jedes microplate sollte durch die Abdeckungsmembran versiegelt werden.

 

6,2 Operationsverfahren

1) Holen Sie Testausrüstung zur Raumtemperatur (℃ 20-25) für mindestens Minute 30, merken Sie, dass jedes Reagens gerüttelt werden muss, um gleichmäßig vor Gebrauch zu mischen, setzen Sie die erforderlichen mikro--gut Streifen in Plattenrahmen. Versiegelte das unbenutzte microplate, Speicher bei dem ℃ 2-8 wieder, nicht eingefroren.

2) Lösungsvorbereitung: verdünntes 40mL des 20 × starken waschenden Puffers mit entionisiertem Wasser am 1:19 (1-teiliger 20 × starker waschender Puffer + 19 Teile entionisierte Wasser). Oder bereiten Sie vor sich, wie gebraucht.

3) Nummerierung: Zahl die Mikrobrunnen entsprechend Proben und Standardlösung; jede Probe und Standardlösung sollten in doppelter Ausführung durchgeführt werden, notieren ihre Positionen.

4) Fügen Sie µL 50 der Probe oder der Standardlösung in unterschiedliche doppelte Brunnen hinzu; addieren Sie 50 UL-, dasenzym dann µL 50 der Antikörperfunktionslösung in jeden Brunnen konjugieren, Mischung leicht, indem Sie manuell die Platte rütteln. Versiegeln Sie das microplate mit der Abdeckungsmembran, andincubate bei 25 ℃ for30min.

5) Gießen Sie Flüssigkeit aus microwell, Klappe heraus, um auf saugfähigem Papier zu trocknen, fügen Sie 250 µL/well des waschenden Puffers hinzu, um microplate für 15-30 s zu waschen, nehmen Sie dann heraus und flattern Sie, um mit saugfähigem Papier zu trocknen, wiederholen Sie 4-5mal. (Wenn schnitt es die Blasen gibt, nachdem man geflattert hat, sie mit den sauberen Spitzen).

6) Färbung: fügen Sie µL 50 µL des Substrates A und dann 50 des Substrates B in jeden Brunnen hinzu. Mischen Sie leicht, indem Sie manuell die Platte, dann rütteln, brüten Sie bei 25 ℃ for15min an der Dunkelheit für Färbung aus.

7) Bestimmung: addieren Sie 50, die µL von Lösung in jeden Brunnen stoppen. Mischen Sie leicht, indem Sie manuell die Platte rütteln. Stellen Sie die Wellenlänge des microplate Lesers an 450nm ein, um den Od-Wert jedes Brunnens zu bestimmen. (Empfehlen Sie sich, den Od-Wert an der Doppel-wellenlänge 450/630nm innerhalb 5 Minuten zu lesen).

 

7. Ergebnisurteil

Es gibt zwei Methoden, zum der Ergebnisse zu beurteilen: das erste man ist das raue Urteil, während das zweite die quantitative Bestimmung ist. Anmerkung, dass der Od-Wert der Probe eine negative Wechselbeziehung mit der AOZ-Konzentration hat.

7,1 qualitative Bestimmung

Der Konzentrationsbereich (ng/mL) von AOZ kann vom Vergleichen des durchschnittlichen Od-Wertes der Probe mit dem der Standardlösung erhalten werden. , dass der Od-Wert der Probe 0,3Ⅰ, ist und das des Beispiel-Ⅱ ist- 1,0, den Od-Wert von Standardlösungen anzunehmen ist: 2,243 für 0ppb, 1,816 für 0.01ppb, 1,415 für 0.03ppb, 0,74 für 0.09ppb, 0,313 für 0.27ppb, 0,155 für 0.81ppb, dementsprechend der Konzentrationsbereich des Beispiel- Ⅰ ist- 0.27ppb zu 0.81ppb, und das des Beispiel-Ⅱ ist- 0.03ppb zu 0.09ppb.

7,2 quantitative Bestimmung

Die Mittelwert der Absorptionswerte wird für den durchschnittlichen Od-Wert (b) der Probe und der Standardlösung erhalten, die durch den Od-Wert (B0) geteilt werden der ersten Standardlösung (0 Standard) und nachher bis zum 100% d.h., die multipliziert sind

 

Prozentsatz des Absorptionswertes =	B	×100%
	B0

 

B-thedurchschnitt Od-Wert der Probe oder der Standardlösung

B0-the Durchschnitt Od-Wert der 0 ng-/mLstandardlösung

Zeichnen Sie die Standardkurve mit den Absorptionsprozentsätzen der Standardlösung und den semilogarithm Werten der AOZ-Standardlösung (ng/mL) als y und X-Achse, beziehungsweise. Lesen Sie die entsprechende Konzentration der Probe von der Standardkurve, indem Sie seinen Absorptionsprozentsatz in die Standardkurve enthalten. Der resultierende Wert wird nachher mit der entsprechenden Verdünnungsfalte multipliziert und schließlich erreicht die AOZ-Konzentration in der Probe.

 

8. Vorkehrungen

1) Die Raumtemperatur unterhalb ℃ 25 oder die Temperatur der Reagenzien und der Proben, die nicht zur Raumtemperatur (℃ 20-25) zurückgegangen werden führen zu einen niedrigeren Standard-Od-Wert.

2) Trockenheit des microplate im Waschvorgang wird von den Situationen einschließlich die nichtlinearen Standardkurven und die unerwünschte Reproduzierbarkeit begleitet; Fahren Sie so zum nächsten Schritt sofort nach Reinigung fort.

3) Mischen Sie gleichmäßig, andernfalls gibt es die unerwünschte Reproduzierbarkeit.

4) Die Endlösung ist- die Schwefelsäure vonlösung 2 M, vermeiden, mit der Haut in Verbindung zu treten.

5) Benutzen Sie nicht die Ausrüstung, die sein Verfallsdatum übersteigt. Der Gebrauch der verdünnten oder verfälschten Reagenzien von den Ausrüstungen führt zu die Änderungen in der Empfindlichkeit und in den Entdeckungsod-Werten. Tauschen Sie nicht die Reagenzien von den Ausrüstungen von verschiedenen Losen aus, um zu verwenden.

6) Setzen Sie das unbenutzte microplate in eine Selbst-dichtungstasche, um sie wieder zu versiegeln. Die Standardlösung und die farblose Farbe, die ehemalig ist, ist lichtempfindlich, und folglich können sie nicht dem Licht direkt ausgesetzt werden.

7) Werfen Sie die Färbungslösung mit jeder möglicher Farbe weg, die die Degeneration dieser Lösung anzeigt. Der Entdeckungswert der Standardlösung 1 (0 ppb) von weniger als 0,5 zeigt seine Degeneration an.

8) Die optimale Reaktionstemperatur ist ℃ 25, und zu hohe oder zu niedrige Temperaturen ergeben die Änderungen in der Entdeckungsempfindlichkeit und IN Od-Werten.

 

9. Lagerung und Verfallsdatum

Lagerung: Speicher bei dem ℃ 2-8, nicht eingefroren.

Verfallsdatum: 12 Monate; Herstellungsdatum ist auf Kasten.

Anmerkung: Wenn die Vakuumverpackung von microplate Durchsickern hat, ist sie noch gültig zu verwenden, beeinflußt nicht das Testergebnis, ist sich zu entspannen, um zu verwenden.

 

 

Q1: Wie lang nimmt es, damit Sie versenden?
A1: Normalerweise Schiffe innerhalb 7 Werktage.

 

Q2: Stützen Sie OEM/ODM?
A2: kann gestützt werden. Wir können entsprechend Ihrem spezifischen Bedarf und spezifischen Quantitäten besonders anfertigen.

 

Q3: Wie tut Ihre Fabrik im Hinblick auf Qualitätskontrolle?
A3: Wir haben Bescheinigung ISO9001 und ISO13485 Bescheinigung, bis jetzt das ganzes Produktionsverfahren, haben wir Standardregeln, willigen wir mit dem relevanten Verhalten und den Gesetzen der Regierung ein.

 

Q4: Wird Kundendienst garantiert?
A4: Wir erbringen Berufstechnischen on-line-Kundendienst. Wenn das Produkt während des Experimentes ausfällt, können wir zur Verfügung stellen
eins-zu-eins Anleitung durch Telefon, Video und andere Formen.

 

Q5: Was ist Ihre Mindestbestellmenge?
A5: 1Kit.

 

Q6: Was ist der Versandart?
A6: Es kann durch Eil (FEDEX, UPS, DHL, EMS, etc.) oder auf dem Luftweg und Boden versendet werden. Bestätigen Sie bitte mit uns, bevor Sie einen Auftrag vergeben.