Melamin-schnelle ELISA Milk Test Kit For-Entdeckungs-Milch 96Wells/Kit ISO9001

Melamin-ELISA-Testkit zum Nachweis von Milch 96Wells/Kit ISO9001

 

1. Prinzip

Dieses Testkit basiert auf dem indirekten kompetitiven Enzymimmunoassay zum Nachweis von Melamin in der Probe.Das Kopplungsantigen ist auf den Mikrotiterstreifen vorbeschichtet.Das Melamin in der Probe und die auf den Mikrotiterstreifen vorbeschichteten Kopplungsantigene konkurrieren um Anti-Melamin-Antikörper.Nach der Zugabe des Enzymkonjugats wird das TMB-Substrat zur Färbung zugegeben.Der Wert der optischen Dichte (OD) der Testprobe hat eine negative Korrelation mit der Melaminkonzentration in der Probe.Dieser Wert wird mit der Standardkurve verglichen und anschließend die Melaminkonzentration erhalten.

 

 

2.Milchtest-KitKomponenten

1	Streifen mit Mikrokavitäten	12 Streifen, davon 8 abnehmbar Brunnen jeweils
2	6× Standardlösung (je 1 mL)	0ppb	0,5 ppb
		1,5 ppb	4,5 ppb
		13,5 ppb	40,5 ppb
3	Dotierende Standardlösung	1 ppm	1 ml
4	Enzymkonjugat	7ml	rote Mütze
5	Antikörper Arbeitslösung	7ml	blaue Kappe
6	Substrat A	7ml	weiße Kappe
7	SubstratB	7ml	schwarze Kappe
8	Lösung stoppen	7ml	gelbe Kappe
9	10x Probenentnahme A-Lösung	50ml	transparente Kappe
10	20x Probenextraktion B-Lösung	50ml	blaue Kappe
11	20-fach konzentrierter Waschpuffer	15ml	weiße Kappe

 

3. Technische Daten

Empfindlichkeit: 0,5 ppb

Inkubatortemperatur: 25℃

Inkubatorzeit: 30min~15min

Nachweisgrenze:

Butter, Süßigkeiten, Käse 10ppb

Kreuzreaktionsrate:

Melamin 100%

Erholungsrate:

Butter 90±25%

Süßigkeiten, Käse 95±25%

 

4. Erforderliche, aber nicht bereitgestellte Materialien

1) Ausrüstung: Mikroplattenleser, Drucker, Vortex, Zentrifuge, Messpipetten, Waage (eine reziproke Empfindlichkeit von 0,01 g), Wasserbad von 70℃;

2) Mikropipetten: Einkanal 20~200 µL, 100~1000 µL;und Mehrkanal 30~300 μl;

 

5. Probenvorbehandlung

Anleitung (Folgende Punkte müssen vor der Vorbehandlung behandelt werden)

1) Nur die Einwegspitzen können für die Experimente verwendet werden und die Spitzen müssen gewechselt werden, wenn sie für andere Reagenzien verwendet werden;

2) Vor dem Versuch muss jede Versuchsausrüstung sauber sein und sollte gegebenenfalls nachgereinigt werden, um die Versuchsergebnisse störende Kontaminationen zu vermeiden.

Lösungsvorbereitung

1) Probenextraktion A-Lösung

Verdünnen Sie die 10-fache Probenextraktionslösung A mit entionisiertem Wasser im Verhältnis 1:9;

2) Probenextraktion der B-Lösung

Verdünnen Sie die 20-fache Probenextraktionslösung B mit entionisiertem Wasser im Verhältnis 1:19.

 

5.1 Butter

1) 1 g frische Butter in ein 50-ml-Zentrifugenröhrchen geben, 5 ml Probenextraktionslösung A hinzufügen, im Wasserbad von 70 °C für 5 Minuten inkubieren, vortexen und 5 Minuten schütteln, bei über 4000 U/min bei Raumtemperatur für 5 Minuten zentrifugieren;

2) Nehmen Sie 50 ul Down-Layer-Flüssigkeit zur Analyse

Verdünnungsfaktor der Probe: 5

5.2 Süßigkeiten, Käse

1) Nehmen Sie 1 g frische Probe in ein 50-ml-Zentrifugenröhrchen, fügen Sie 5 ml Probenextraktionslösung B hinzu, inkubieren Sie 5 Minuten lang im Wasserbad von 70 °C, wirbeln und schütteln Sie 5 Minuten lang, zentrifugieren Sie bei über 4000 U/min bei Raumtemperatur für 5 Minuten;

2) Nehmen Sie 50 ul Down-Layer-Flüssigkeit zur Analyse

Verdünnungsfaktor der Probe: 5

 

6. ELISA-Verfahren

6.1 Anweisungen

1 Bringen Sie alle Reagenzien und Mikrotiterstreifen auf Raumtemperatur (20-25 ℃).

2 Alle Reagenzien sofort nach Gebrauch auf 2-8 ℃ zurückstellen.

3 Die Reproduzierbarkeit der ELISA-Analyse hängt in hohem Maße von der Konsistenz des Plattenwaschens ab.Die korrekte Durchführung des Plattenwaschens ist der Schlüsselpunkt in den Verfahren von ELISA.

4 Für die Inkubation bei konstanten Temperaturen müssen alle Proben und Reagenzien Lichteinwirkung vermeiden, und jede Mikrotiterplatte sollte durch die Abdeckmembran verschlossen werden.

6.2 Betriebsverfahren

1)Bringen Sie das Testkit für mindestens 30 Minuten auf Raumtemperatur (20-25 ℃), beachten Sie, dass jedes Reagenz vor Gebrauch gleichmäßig geschüttelt werden muss;Legen Sie die erforderlichen Mikrotiterstreifen in die Plattenrahmen.Unbenutzte Mikrotiterplatte wieder versiegeln, bei 2-8 °C lagern, nicht einfrieren.

2)Lösungsvorbereitung: Verdünnen Sie 15 ml des 20-fach konzentrierten Waschpuffers mit deionisiertem Wasser auf 300 ml für die Verwendung;

3)Nummerierung: Mikrokavitäten nach Proben und Standardlösung nummerieren;jede Probe und Standardlösung sollte doppelt durchgeführt werden;ihre Positionen notieren.

4)Geben Sie 50 µl der Proben-/Standardlösung in getrennte Duplikatvertiefungen, fügen Sie dann 50 µl Enzymkonjugat hinzu, geben Sie dann 50 µl Antikörper-Arbeitslösung in jede Vertiefung, schütteln Sie sie gut, versiegeln Sie die Mikrotiterplatte mit der Abdeckmembran und inkubieren Sie sie 30 Minuten lang bei 25 °C;

5)Gießen Sie die Flüssigkeit aus den Vertiefungen, waschen Sie die Mikrotiterplatte mit dem verdünnten Waschpuffer bei 250 µl/Vertiefung 5-6 Mal.Die Vertiefung jeweils 15-30 Sekunden mit dem verdünnten Waschpuffer tränken und dann auf saugfähigem Papier zum Trocknen aufschlagen (wenn nach dem Aufschlagen Blasen vorhanden sind, schneiden Sie sie mit den sauberen Spitzen ab).

6)Färbung: 50 µL Substrat A, dann 50 µL Substrat B in jede Vertiefung geben.Vorsichtig mischen, indem die Platte manuell geschüttelt wird, und zur Färbung 15 Minuten lang bei 25 °C im Dunkeln inkubieren;

7)Bestimmung: 50 µL der Stopplösung in jede Vertiefung geben.Mischen Sie vorsichtig, indem Sie die Platte manuell schütteln.Stellen Sie die Wellenlänge des Mikroplatten-Lesegeräts auf 450 nm ein, um den OD-Wert jeder Vertiefung zu bestimmen.(Es wird empfohlen, den OD-Wert bei der Dual-Wellenlänge 450/630 nm innerhalb von 5 Minuten abzulesen).

 

7. Ergebnisbeurteilung

Es gibt zwei Methoden, um die Ergebnisse zu beurteilen;das erste ist die grobe Beurteilung, während das zweite die quantitative Bestimmung ist.Beachten Sie, dass der OD-Wert der Probe eine negative Korrelation mit dem Gehalt an Melamin aufweist.

7.1 Qualitative Bestimmung

Der Konzentrationsbereich (ng/ml) kann aus dem Vergleich des durchschnittlichen OD-Werts der Testprobe mit dem der Standardlösung ermittelt werden.Unter der Annahme, dass der OD-Wert der ProbeⅠ 0,3 und der der ProbeⅡ 1,0 beträgt, beträgt der OD-Wert der Standardlösungen: 2,043 für 0 ppb, 1,604 für 0,5 ppb, 1,101 für 1,5 ppb, 0,512 für 4,5 ppb, 0,161 für 13,5 ppb , 0,055 für 40,5 ppb, entsprechend beträgt der Konzentrationsbereich der ProbeⅠ 4,5 bis 13,5 ppb und der der Probe Ⅱ 1,5 bis 4,5 ppb.

7.2 Quantitative Bestimmung

Der Mittelwert der Extinktionswerte entspricht dem prozentualen Anteil des mittleren OD-Wertes (B) der Messprobe und der Standardlösung dividiert durch den OD-Wert (B0) der ersten Standardlösung (0-Standard) und anschließend multipliziert mit 100 %, das ist

 

Prozentsatz des Extinktionswerts =	B	×100%
	B0

 

B – der durchschnittliche (doppelte Vertiefungen) OD-Wert der Testprobe oder der Standardlösung

B0 – der durchschnittliche OD-Wert der 0 ng/ml-Standardlösung

Zeichnen Sie die Standardkurve mit den Absorptionsprozentsätzen der Standardlösungen und den halblogarithmischen Werten der Melamin-Standardlösungen (ng/mL) als Y- bzw. X-Achse.Lesen Sie die entsprechende Konzentration der Testprobe aus der Standardkurve ab, indem Sie den Absorptionsprozentsatz in die Standardkurve aufnehmen.Der resultierende Wert wird anschließend mit dem entsprechenden Verdünnungsfachen multipliziert und man erhält schließlich die Melaminkonzentration in der Probe.

 

8. Vorsichtsmaßnahmen

1)Die Raumtemperatur unter 25℃ oder die Temperatur der Reagenzien und der Testproben, die nicht auf Raumtemperatur (20-25℃) zurückgebracht werden, führt zu einem niedrigeren Standard-OD-Wert.

2)Die Trockenheit der Mikroplatte im Waschprozess wird von Situationen begleitet, die die nichtlinearen Standardkurven und die unerwünschte Reproduzierbarkeit umfassen;Fahren Sie also direkt nach dem Waschen mit dem nächsten Schritt fort.

3)Gleichmäßig mischen, sonst kommt es zur unerwünschten Reproduzierbarkeit.

4)Die Stopplösung ist die 2 M Schwefelsäurelösung, Hautkontakt vermeiden.

5)Verwenden Sie das Kit nicht nach Ablauf des Verfallsdatums.Die Verwendung von verdünnten oder verfälschten Reagenzien aus den Kits führt zu Änderungen der Empfindlichkeit und der OD-Nachweiswerte.Tauschen Sie die Reagenzien aus Kits mit unterschiedlichen Chargennummern nicht gegeneinander aus.

6)Legen Sie die unbenutzte Mikrotiterplatte in einen selbstversiegelnden Beutel, um sie wieder zu versiegeln.Die Standardsubstanz und der farblose Farbbildner sind lichtempfindlich und können daher nicht direkt dem Licht ausgesetzt werden.

7)Verwerfen Sie die Färbelösung mit jeder Farbe, die auf die Degeneration dieser Lösung hinweist.Der Nachweiswert der Standardlösung 1 (0 ppb) von weniger als 0,5 zeigt ihre Degeneration an.

8)Die optimale Reaktionstemperatur beträgt 25 ℃, und zu hohe oder niedrige Temperaturen führen zu Änderungen der Nachweisempfindlichkeit und der OD-Werte.

 

9. Aufbewahrungs- und Verfallsdatum

Lagerung: bei 2-8 ℃ gelagert, nicht eingefroren.

Ablaufdatum: 12 Monate;Produktionsdatum steht auf der Verpackung

Hinweis: Wenn die Vakuumverpackung der Mikroplatte undicht ist, kann sie weiterhin verwendet werden. Beeinflussen Sie das Testergebnis nicht. Seien Sie entspannt bei der Verwendung.

 

 

Q1: Wie lange dauert der Versand?
A1: Wird normalerweise innerhalb von 7 Werktagen versendet.

 

Q2: Unterstützen Sie OEM/ODM?
A2: kann unterstützt werden.Wir können nach Ihren spezifischen Bedürfnissen und spezifischen Mengen anpassen.

 

Q3: Wie geht es Ihrer Fabrik in Bezug auf die Qualitätskontrolle?
A3: Wir haben die ISO9001-Zertifizierung und die ISO13485-Zertifizierung, bisher den gesamten Produktionsprozess, wir haben Standardregeln, wir halten uns an das relevante Verhalten und die Gesetze der Regierung.

 

Q4: Ist der Kundendienst garantiert?
A4: Wir bieten professionellen technischen Online-Kundendienst.Wenn das Produkt während des Experiments ausfällt, können wir es bereitstellen
Eins-zu-eins-Beratung über Telefon, Video und andere Formen.

 

Q5: Was ist Ihre Mindestbestellmenge?
A5: 1Kit.

 

Q6: Was ist die Versandart?
A6: Es kann per Express (FEDEX, UPS, DHL, EMS usw.) oder auf dem Luft- und Bodenweg versendet werden. Bitte bestätigen Sie dies mit uns, bevor Sie eine Bestellung aufgeben.